核糖核酸酶A(Ribonuclease A,常用縮寫(xiě)RNase A),一種含4個(gè)二硫鍵的單鏈多肽,分子量約為13.7 kDa(氨基酸序列)。作為一種核糖核酸內(nèi)切酶(endoribonuclease),特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)殘基。具體來(lái)說(shuō),切割識(shí)別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類(lèi)核苷酸3’-核糖上磷酸基團(tuán)形成的磷酸二酯鍵,從而使得2’, 3’-環(huán)磷酸水解為對(duì)應(yīng)的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)RNase A切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和A-PG)。RNase A切割單鏈RNA活性最高,推薦工作濃度為1-100 μg/mL,兼容于各種反應(yīng)體系。低鹽濃度(0-100 mM NaCl),可用來(lái)切割單鏈RNA,雙鏈RNA,以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。然而,高鹽濃度(≥ 0.3 M),RNase A僅特異性切割單鏈RNA。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(hào)(CAS NO.) | 9001-99-4 |
外觀(Appearance) | 白色凍干粉末 |
激活劑(Activator) | 鈉鹽、鉀鹽等 |
抑制劑(Inhibitor) | 核酸酶抑制劑 |
失活方法(Inactivation) | 加熱不會(huì)失活,建議用離心柱或者酚氯仿抽提來(lái)充分去除 |
來(lái)源(Source) | 牛胰腺 |
溶解性(Solubility) | 溶于水(10 mg/mL) |
酶活力(Activity) | ≥ 60 Kunitz units/mg |
配置存儲(chǔ)方法
此為RNase A儲(chǔ)存液配制的常用方法之一,也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)的方法,或者參考文獻(xiàn)資料使用其他方法制備儲(chǔ)存液(如直接溶于10 mM Tris-HCl, pH 7.5或者Tris-NaCl溶液)。在中性條件下煮沸RNase A溶液,會(huì)有RNase沉淀形成;在更低的pH下將其煮沸,如有沉淀可以觀察到,可能由于蛋白雜質(zhì)存在造成。煮沸之后若發(fā)現(xiàn)沉淀,可通過(guò)高速離心(13,000 rpm)去除雜質(zhì),然后分裝凍存。 |
1)利用10 mM的醋酸鈉(pH 5.2)制備10 mg/mL 的RNase A 儲(chǔ)存液; |
2)100℃加熱15 min; |
3)冷卻到室溫,加入1/10體積的1 M Tris-HCl(pH 7.4),調(diào)其pH至7.4(如:5 mL 10 mg/mL的RNase 儲(chǔ)存液加入500 μL 1 M Tris-HCl, pH 7.4); |
4)分裝于-20℃凍存,可穩(wěn)定保存長(zhǎng)達(dá)2年。 |
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱(chēng) |
貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
RNA酶 |
G-05-0100 |
100mg | 詢(xún)價(jià) |
RNA酶 |
G-05-1000 |
1g | 詢(xún)價(jià) |
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