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產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

本產(chǎn)品是采用 SYBR Green I 嵌合熒光法進(jìn)行Real Time PCR的專用試劑，將熱啟動(dòng)Taq DNA 聚合酶、dNTP、SYBR Green I 等試劑預(yù)混成即用的 2x Mix，可對(duì)目標(biāo) cDNA 進(jìn)行快 速并具有高特異性的定量檢測(cè)。采用抗體法熱啟動(dòng) Taq 酶，高溫加熱前，抗 Taq 單克隆抗體 與 Taq 酶緊密結(jié)合，抑制 Taq 的聚合酶活性，從而抑制在低溫條件下出現(xiàn)的由引物和模板 DNA 非特異性雜交或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。抗體會(huì)在 PCR 反應(yīng)的預(yù)變性步驟中 完全失活，不會(huì)干擾后續(xù)的 Taq 酶聚合反應(yīng)，大大提高了 PCR 反應(yīng)的靈敏度及特異性。2x 濃度預(yù)混反應(yīng)體系，最大限度地減少人為誤差、降低污染機(jī)率、節(jié)約實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間，快速簡(jiǎn) 便、通用性廣、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好。 

產(chǎn)品組分：

保存條件：
收到本產(chǎn)品后，請(qǐng)立即置于-20℃避光保存，一年有效。從-20℃取出使用時(shí)，將凍存的
Universal SYBR qPCR Mix 和 ROX Reference Dye 融解，然后輕輕顛倒混勻，待溶液完全均
一后再行使用。如需一段時(shí)間內(nèi)經(jīng)常取用，可在 2～8℃條件下儲(chǔ)存 3 個(gè)月。避免反復(fù)多次
凍融。

使用說明： 一、配制 Real-Time PCR 反應(yīng)體系： 

1、將所有試劑 2×Universal SYBR qPCR Mix，ROX Reference Dye，模板，引物和 RNase-Free ddH2O，在室溫下融解并徹底混勻，避免產(chǎn)生氣泡。短暫離心后，置于冰上按照下表配制反 應(yīng)液。

* 一般來說反應(yīng)體系中引物終濃度為 0.2 uM 即可得到較好的擴(kuò)增效果。當(dāng)反應(yīng)性能比較差時(shí)，可以在終 濃度 0.2~0.4 uM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度，為獲得理想的 qPCR 效果，擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度建議為 80-200bp。 ** 模板量：10-100 ng 基因組 DNA，或 1-10 ng cDNA 為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝 數(shù)不同，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。另外，Two Step RT-PCR（兩步法反轉(zhuǎn)錄） 反應(yīng)的 cDNA（RT 反應(yīng)液）作為模板時(shí)的添加量不要超過 PCR 反應(yīng)液總體積的 10%。 

2、蓋上或密封反應(yīng)管/PCR 板，輕輕混勻。短暫離心，確保所有組分都在管/板底。

二、進(jìn)行 Real-Time PCR 反應(yīng) 1、建議采用兩步法 PCR 反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)。

若模板量較低等因素導(dǎo)致擴(kuò)增效果不佳，或者對(duì)于超過 350 bp 或者高 GC 含量的擴(kuò)增子， 建議增加延伸時(shí)間至 60 s 或者采用三步法以提高擴(kuò)增效率。

注：本產(chǎn)品是使用抗體修飾的 HotStart DNA 聚合酶，，如果在 PCR 反應(yīng)前進(jìn)行模板的預(yù)變性，通常設(shè)定 為 95℃、2 min，復(fù)雜或高 GC 模板適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間至 5 min。 以上舉例為常規(guī) qPCR 反應(yīng)系統(tǒng)，僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而有所差異，需根 據(jù)模板、引物、目的片段的特點(diǎn)設(shè)定最佳反應(yīng)條件，并根據(jù)比例放大或縮小反應(yīng)體系。

2、上機(jī)檢測(cè)：將反應(yīng)體系置于熒光定量 PCR 儀中，運(yùn)行程序收集數(shù)據(jù)并分析結(jié)果。